膜细胞骨架连接蛋白和α-连接蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

贺华勇 朱小勇 乔士兴：广州市正骨医院 广东广州 510045

膜细胞骨架连接蛋白和α-连接蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

贺华勇 朱小勇 乔士兴
THE EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF EZRIN AND α－CAT IN GASTRIC CARCINOMA
HE Huayong, ZHU Xiaoyong, QIAO Shixing

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  【摘 要】 目的 探讨膜细胞骨架连接蛋白（Ezrin）和α－连接蛋白（α－cat）在胃癌组织及正常胃粘膜组织中的表达并分析该表达与胃癌生物学行为的关系。方法 用免疫组化方法检测128例胃癌组织标本与30例正常胃粘膜组织标本中Ezrin和α－cat的表达。其中胃癌组织标本根据其是否存在淋巴结转移及远处转移另行分组进行相关性分析。结果 Ezrin在胃癌组织和正常胃粘膜组织中表达阳性率分别为633%和333%（P<001），α－cat则为266%和100%（P<001）。Ezrin在胃癌组织中的表达与淋巴结转移及远处转移呈正相关，而α－cat在胃癌组织中的表达与淋巴结转移及远处转移呈负相关。结论 Ezrin与α－cat在胃粘膜组织中的表达与胃癌的发生有关，它们对胃癌的诊断及其恶性程度的评估有所帮助。
  【关键词】 膜细胞骨架连接蛋白,α-连接蛋白,胃癌,生物学

  【Abstract】 Objective To explore the expression of Ezrin and α－cat in gastric carcinoma and normal gastric mucosa and to analyze the relationship between their expression and biological behaviors. Method The expression of Ezrin and α－cat in 128 gastric carcinoma samples and 30 normal gastric mucosal samples were tested by immunohistochenistry. The gastric carcinoma samples were grouped according to their status of lymphatic metastasis and distant metastasis, and correlation analysis was made. Result The positive expression rate of Ezrin in gastric carcinoma samples and normal gastric mucosal samples were 63.3% and 33.3% respectively, and that of α－cat were 26.6% and 100% respectively. The expression of Ezrin in gastric carcinoma showed a positive correlation with both lymphatic metastasis and distant metastasis, and that of α－cat showed a negative correlation. Conclusion The expression of Ezrin and the negative expression of α－cat are involved in the occurrence and development of gastric carcinoma. They may be helpful with diagnosing gastric carcinoma and accessing its malignant levels.
     【Key words】 Connexin membrane cytoskeleton,α-connexin, Gastric Cancer, Biology
     【Author′s address】 Guangzhou orthopedic hospital, Guangzhou, Guangdong, 510045
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.12.008 

  膜细胞骨架连接蛋白是ERM家族成员之一，是将胞外信号传递到胞内骨架蛋白的重要分子。近年研究发现，在多种肿瘤中膜细胞骨架连接蛋白与肿瘤的侵袭和转移密切相关，膜细胞骨架连接蛋白表达高的胃癌患者预后远较表达低的预后差［1］。E-钙粘附蛋白(E-cad)是一种介导同种细胞间粘附的跨膜糖蛋白，主要作用于粘着连接，对上皮细胞的极性与组织结构的形成和维持具有重要作用，其中研究较多的是α－连接蛋白（α－cat），我们应用SP免疫组化方法检测α－连接蛋白和膜细胞骨架连接蛋白在胃癌和正常胃组织中的表达情况，探讨α－连接蛋白和膜细胞骨架连接蛋白表达与胃癌分化、TNM分期、淋巴结及远处转移的关系，为胃癌的预后提供一个较为客观的定量评价指标。
     1 材料和方法
1.1 材料
     128例胃癌标本来自本院和吉林大学第二医院病理科（2008年1月～2013年6月），所有病例术前均未经抗癌治疗。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色病理确诊。128例胃癌中，男68例，女60例；年龄28~86岁，平均485岁；瘤体直径05~11 cm，平均41 cm；组织学类型为管状腺癌68例，乳头状腺癌46例，未分化癌14例；淋巴结转移：阳性者82例，阴性者46例；远处转移：阳性者42例（肝转移28例，盆腔种植7例，肺转移6例，骨转移1例），阴性者86例；TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期28例，Ⅲ期38例，Ⅳ期46例；肿瘤细胞分化：高分化34例，中分化38例，低分化56例。另取距癌肿边缘6厘米以上正常胃组织30例对照。
1.2 主要试剂和方法
     即用型抗α－连接蛋白多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司(Sigma公司产品)，即用型膜细胞骨架连接蛋白单抗购自福建迈新生物技术开发公司。染色步骤按说明书进行，用PBS液代替一抗作为阴性对照，已知阳性标本作阳性对照。
1.3 结果判断
     根据染色强度及显色细胞比例，将染色结果分为-、+、+ + 3级。①按切片中细胞有无显色及深浅评分，无显色为0分，棕黄色为1分，棕褐色为2分。②根据显色细胞比例评分：<30%为1分，30%~71%为2分，>71%为3分。以上2种评分之和为每例的积分，按积分高低分为：0分为阴性( - )，1~3分为弱阳性( + )，4~6分为强阳性( + + )［2］。
1.4 统计学处理
     数据处理采用2检验和相关分析，以P<005为有显著差异。
     2 结果
2.1 α－连接蛋白和膜细胞骨架连接蛋白在正常胃及胃癌组织中的表达
     α－连接蛋白在正常胃粘膜上皮细胞胞浆及胞膜上均有阳性染色，尤其是细胞-细胞交界处，在128例胃癌组织中，有34例（266％）表达正常，94例（734%）表达减低或不表达，二者差异性显著(P<001）。在正常胃组织中膜细胞骨架连接蛋白表达较低（333％），在128例胃癌组织中，81例（633%）呈强表达，二者差异性显著(P<001)，见表1。
2.2 α－连接蛋白和膜细胞骨架连接蛋白的表达与胃癌组织分化的关系 
     随着胃癌组织分化程度的降低，α－连接蛋白表达逐渐降低，膜细胞骨架连接蛋白表达逐渐增高，二者均具有显著性差异(P<005)，见表2。
2.3 α－连接蛋白和膜细胞骨架连接蛋白的表达与胃癌TNM分期的关系
     随着胃癌TNM分期的逐渐增加，α－连接蛋白在胃癌中的表达明显降低，各组之间有显著性差异(P<005)，而膜细胞骨架连接蛋白的表达率显著增高，Ⅲ、Ⅳ期的表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P<005)，见表2。
2.4 α－连接蛋白和膜细胞骨架连接蛋白的表达与胃癌淋巴结转移及远处转移的关系
     α－连接蛋白在有淋巴结或远处转移的胃癌组织中的表达率明显低于无转移者(P<001)，而膜细胞骨架连接蛋白在有淋巴结或远处转移的胃癌组织中的表达率明显高于无转移者(P<005)，见表2。

表1 α－cat和Ezrin在胃癌及正常胃组织中的表达

n（%）

组织	例数	α－cat蛋白阳性表达	α－cat蛋白阴性表达	Ezrin蛋白阳性表达	Ezrin蛋白阴性表达
胃癌	128	34（26.6）	94（73.4）	81（63.3）	47（36.7）
正常胃组织	30	30（100.0）	0（0.00）	10（33.3）	20（66.7）

表2 α－cat和Ezrin的表达与胃癌临床病理特征的关系

n（%）

临床病理特征	例数	α－cat蛋白阳性表达	α－cat蛋白阴性表达	Ezrin蛋白阳性表达	Ezrin蛋白阴性表达
分化程度
高	18	11（61.1）	7(38.9)	5（27.8）	13(72.2）
中	36	15(41.7)	21(58.3)	21(58.3)	15(41.7)
低	74	8(10.8)	66(89.2)	55(74.3)	19(25.7)
TNM分期
Ⅰ	16	10(62.5)	6(37.5)	4(25.0)	12(75.0)
Ⅱ	28	12(42.9)	16(57.1)	13(46.4)	15(53.6)
Ⅲ	38	8(21.1)	30(78.9)	25(65.8)	13(34.2)
Ⅳ	46	4(8.7)	42(91.3)	39(84.8)	7(15.2)
淋巴转移
有	82	15(18.3)	67(81.7)	65(79.3)	17(20.7)
无	46	19(41.3)	27(58.7)	16(34.8)	30(65.2)
远处转移
有	42	5(11.9)	37(88.1)	35(83.3)	7(16.7)
无	86	29(33.7)	57(66.3)	46(53.5)	40(46.5)

3 讨论
     膜细胞骨架连接蛋白是ERM家族中研究较深入的细胞内骨架蛋白，是将细胞外信号传导至细胞内的重要蛋白，对细胞与细胞、细胞和基质之间的粘附起重要的调节作用，参与细胞运动、粘附、免疫调节及肿瘤吞噬等多种功能。活化的膜细胞骨架连接蛋白通过连接F-肌动蛋白与胞膜的CD44、E-钙粘蛋白、细胞间粘附因子1(ICAM-1)、ICAM-2等发挥功能［3］。许多研究证明膜细胞骨架连接蛋白与多种肿瘤的发生及转移密切相关，JING CHUN JIN等［1］通过免疫组化的方法证明膜细胞骨架连接蛋白在胃癌组织高表达，阳性率与胃癌的淋巴转移正相关；ZHAO J等［4］通过免疫组化发现，在胃癌组织中膜细胞骨架连接蛋白阳性表达明显高于正常胃组织和胃良性病变，提示膜细胞骨架连接蛋白高表达可能与胃癌的发生发展关系密切。SAITO S等［5］发现，下调膜细胞骨架连接蛋白的表达能明显降低恶性肿瘤细胞的增殖速度，减弱细胞穿透能力，从而降低恶性肿瘤的恶性生物学行为。本实验表明，在胃癌组织中膜细胞骨架连接蛋白表达程度明显高于正常胃组织，二者具有显著性差异(P<001)，提示膜细胞骨架连接蛋白的表达增高与胃癌的发生明显相关，与文献报道一致。本实验同时还证明胃癌组织中膜细胞骨架连接蛋白的表达水平与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移有明显的相关性，表明膜细胞骨架连接蛋白与胃癌的发生及生物学行为关系密切。因此，胃癌组织中膜细胞骨架连接蛋白表达程度，可作为衡量胃癌生物学行为的一个客观实用的指标。
     E-钙粘蛋白属于钙粘蛋白超家族，在细胞内E-钙粘蛋白是通过E-钙粘蛋白复合体发挥作用的，E-cad复合体功能的正常发挥必须依靠α－cat，E-cad及α－cat对于维持细胞间的粘附起着极其重要的作用，大量研究表明，E-cad及α－cat的表达减弱或缺乏会导致细胞间的粘着破坏，细胞间的粘附性降低，易于脱离、迁移并侵入附近组织，造成肿瘤的局部和远处转移。张建新等 ［6］研究了E-cad在胃癌中的表达及其与胃癌侵袭及淋巴结转移的关系，认为胃癌组织中E-cad低表达或失表达与胃癌侵袭转移密切相关。ZHOU YN等［7］发现，与相邻的正常胃粘膜组织或正常人的胃粘膜组织相比，69％胃癌标本的α－连接蛋白的mRNA表达下调或消失，与我们的实验结果一致，随着胃癌的分化程度降低，TNM分期上升及伴随淋巴结和远处转移的出现，α－连接蛋白的表达明显降低。张毅钦等［8］用免疫组化的方法检测86例结肠癌及癌周正常结肠组织中α－连接蛋白的表达情况，结论与本实验一致。
     α－连接蛋白通过促进细胞间的粘附作用，使肿瘤细胞间保持密切接触从而抑制肿瘤向局部和远处转移，减轻恶性肿瘤的侵袭能力。PUJUGUET P等［9-10］发现，膜细胞骨架连接蛋白的突变体导致E-cad从细胞内向细胞外转运减慢，导致细胞间的连接松散，肿瘤细胞的侵袭能力增强，有利于恶性肿瘤的转移。过度表达的膜细胞骨架连接蛋白也发挥同样的作用，通过扰乱α－连接蛋白的正常功能，导致E-cad隔离在细胞内，从而造成细胞间连接松散，有利于肿瘤转移。本实验发现，膜细胞骨架连接蛋白的高表达和α－连接蛋白的低表达与胃癌分化程度及TNM分期显著相关，且在膜细胞骨架连接蛋白高表达和α－连接蛋白低表达的胃癌患者中肿瘤淋巴结转移和远处转移的几率大大增加，提示膜细胞骨架连接蛋白和α－连接蛋白在胃癌组织中的表达和胃癌的生物学行为显著相关，检测二者在胃癌组织中的表达情况，可以客观的判断胃癌的恶性程度，为临床提供参考。

参考文献
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［5］ SAITO S,YAMAMOTO H,MUKAISHO K,et al.Mechanisms Underlying Cancer Progression Caused by Ezrin Overepression in Tongue Squamolls Cell Carcinoma［J］.PLOSONE,2013,8(1):54881.
［6］ 张建新，毛正发，王旭青,等．胃癌中Ezrin，E-cadherin及CD44的表达及意义［J］.世界华人消化杂志，2008，16（7）：776－779.
［7］ ZHOU YN，XU CP，CHEN Y，et al. AIPha-catenin_ expreesion is decreased in patents with gastric carcinoma［J］．World Joumal of Gasteroenterology, 2005，11(22)：3468-3472．
［8］ 张毅钦，贺华勇.基质金属蛋白酶和α－连接蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义［J］.现代医院，2009,9（6）：20-22.
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