新辅助化疗对三阴性乳腺癌患者Ki67的影响

张 蓉 曹 茵 张爱玲 黄河清 钟慕仪 王西跃 ：东莞市人民医院 广东东莞 523018 

新辅助化疗对三阴性乳腺癌患者Ki67的影响

张 蓉 曹 茵 张爱玲 黄河清 钟慕仪 王西跃
THE INFLUENCE OF NEOADJUVANT CHEMOTHERAPY FOR TRIPLE NEGATIVE BREAST CANCER IN PATIENTS WITH KI67 NUCLEAR ANTIGENS 
ZHANG Rong, CAO Ying, ZHANG Ailing, et al 

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  【摘 要】 目的  探讨新辅助化疗对三阴性乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)患者核抗原Ki67的影响。方法  选取2012年6月～2014年3月期间我院新辅助化疗治疗的TNBC患者136例，依据并采用免疫组化法检测所有患者乳腺癌组织中Ki67表达情况，化疗前分为阳性组和阴性组，化疗后依据Ki67表达改变情况阳转阴（A）组、阴转阳（B）组、阳不变（C）组和阴不变（D）组，随访5年，统计分析所有患者化疗疗效和生存情况。结果  化疗前，阳性组患者化疗疗效明显优于阴性组，差异有统计学意义（p<0.05）；化疗后，在疗效方面，A组> C组>D组> B组，差异有统计学意义（p<0.05）；在5年内生存率方面，A组> C组>D组> B组，差异有统计学意义（p<0.05）。结论 新辅助化疗可致使TNBC癌患者Ki67的表达发生转变，有可能改善患者生存预后，值得临床作进一步研究。
  【关键词】 新辅助化疗 三阴性乳腺癌 核抗原Ki67 

  【Abstract】 Objective  To discuss the influence of neoadjuvant chemotherapy for Triple Negative Breast Cancer(TNBC) in patients with Ki67 nuclear antigens. Methods  136 patients with TNBC were selected from June 2012 to March 2014 in our Hospitals, and on the basis, immunohistochemical method was used to detect all patients Ki67 expression in breast cancer tissue. The patients were divided into positive group and negative group before chemotherapy, and on the basis of Ki67 expression changes after chemotherapy and they were divided into yang to yin(A) group, yin to yang(B) group, Yang invariant(C) group and Yin invariant(D) group. Followed up for 5 years, all patients of chemotherapy efficacy and survival were analysed. Results  Before chemotherapy, positive group chemotherapy curative effect was better than negative group, and the difference was statistically significant(p<0.05); After chemotherapy, in the aspect of effect, A group>C group>D group> Bgroup(p<0.05); After chemotherapy, in the aspect of curative effect, A group>C group>D group> Bgroup(p<0.05). Conclusion Neoadjuvant chemotherapy can change the patients with TNBC cancer Ki67 positive expression, and it possible to improve the prognosis of patients survival, which is worth for further clinical research.
     【Key words】  neoadjuvant chemotherapy; Triple Negative Breast Cancer; Ki67 nuclear antigens 
     【Author′s address】 Dongguan People's Hospital, Dongguan, Guangdong, 523018, China
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.04.018 

  乳腺癌属于一种最常见的妇科恶性肿瘤，三阴性乳腺癌(TNBC)是其中一种最特殊的乳腺癌，其特殊性为机体组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体（HER2）均表现为阴性［1-2］。目前，TNBC的内科治疗主要以化疗为主，但由于其特殊性，即缺乏内分泌及抗HER2治疗的靶点，尚未有统一针对性的治疗方案［3］。因此，对三阴乳腺癌的分子生物学特征进行研究并依此制定临床化疗方案，判断肿瘤预后，对寻找靶向治疗的方法具有重要的临床指导意义，但临床上化疗方案对TNBC患者具有不同的疗效，其预后水平也存在较为明显的差异［4-5］。对此，为了进一步提高TNBC患者的疗效和预后，我院通过给予患者新辅助化疗治疗并检测Ki67的表达情况，以探讨新辅助化疗与Ki67表达的关系，现将结果报道如下。
     1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 临床资料 选取2012年6月～2014年3月期间我院确诊治疗的TNBC患者136例，所有患者均为女性，年龄28~67岁，平均年龄（4259±869）岁，肿瘤大小097~613 cm，平均肿瘤大小（328±075）cm，其中>5 cm 37例，2~5 cm 64例，<2 cm 25例，临床分期分为Ⅰ期15例，Ⅱ期37例，Ⅲ期63例，Ⅳ期21例，依据乳腺癌组织中Ki67表达情况，化疗前分为阳性组98例和阴性组38例，阳性组：阴性组：化疗后依据Ki67表达改变情况阳转阴（A）组67例、阴转阳（B）组31例、阳不变（C）组24例和阴不变（D）组14例，所有患者术前均未接受过放疗、手术、化疗等任何处理，且治疗时均采用新辅助化疗治疗。
1.1.2 纳入和排除标准 纳入标准［6］：①经双乳彩超、X线和粗芯针穿刺获得组织进行病理诊断首次确诊为TNBC；②均通过病理穿刺获得组织样本；③签署知情同意书且经我院医药伦理委员会审批通过；排除标准［7］：①其他肿瘤发病；②伴有心、肝、肾等重要脏器严重性疾病；③中途终止或拒绝参与本次研究。
1.2 方法 所有患者均常规粗芯针穿刺获取乳腺组织，并进行常规10%福尔马林液固定、包埋、切片等处理。术前准备完成后，给予常规乳腺手术治疗，术中切除的病变组织送往病理科进行Ki67表达检测，术前给予2~6个周期的新辅助化疗治疗，具体方法如下。
1.2.1 新辅助化疗疗法 新辅助化疗方案为 4 周期的 CEF 方案 (环磷酰胺+表柔比星+5-氟尿嘧啶)，具体实施操作为：每天对患者通过静脉注射环600 mg/m2磷酰胺、60 mg/m2表柔比星，600 mg/m2的5-氟尿嘧啶，每个周期持续时间为21 d，总化疗时间为4个周期（依据患者病情、毒副反应等实际情况进行增减），化疗期间给予适量的抗肿瘤药物治疗，化疗结束后2个周期行常规乳腺手术治疗。
1.2.2 免疫组化法检测［8］ 所有乳腺组织样本通过缓冲液PBS 冲洗切片，并进行常规免疫组化法检测组织中Ki67的表达，阳性检测一抗均按1∶ 100制成稀释液，阳性对照检测为已知阳性切片，阴性对照检测采用磷酸盐缓冲液代替一抗，所有操作均由同一名医师严格在无菌条件下依据Ki67检测试剂盒说明书和相关规定进行。
1.3 观察指标和标准 所有组织样本结果由两名高年资病理科医师通过双盲法进行Ki67阴阳性表达评估，意见不一时，由另一同资格医师参与评判，每份样本随机抽取3个高倍镜视野进行评估，同时通过电话方式进行为期5年的随访，统计分析其与TNBC患者疗效和生存预后的关系。Ki67阴阳性表达依据二级计分法进行判断［9］：①细胞数计数CN：<5%为0分，5%~25%为1分，25%~50%为2分，50%~75%为3分，>75%为4分；②染色深浅RN：无明显染色为0分，染色呈黄色为1分，呈棕黄色为2分，棕褐色为3分；③阴阳性判定：CN+RN之和≥4分为阳性，<4分为阴性。化疗疗效评估［10］：世界卫生组织（WHO）实体瘤疗效评价标准（B超或X线摄片检测）：未发现肿瘤、临床症状基本消失为完全缓解（CR），乳房肿块缩小高于50%、临床症状明显缓解为部分缓解（PR），乳房肿块缩小但未高于50%或增大低于20%，临床症状无变化为稳定（SD），乳房肿块增大高于20%且临床症状加重为进展（PD），化疗有效率为n=（CR+PR）/总例数。
1.4 统计学数据处理 采用SPSS 150统计软件处理数据，计数资料比较采用2检验，计量资料采用t检验，多组资料之间采用F检验，p<005时差异有统计学意义。
2 结果
2.1 新辅助化疗前Ki67表达与TNBC患者化疗疗效的关系
     化疗后，Ki67阳性组患者有效率8797%，阴性组患者有效率7097%，前者明显高于后者，差异有统计学意义（p<005），见表1。 

表1 新辅助化疗前Ki67表达与TNBC患者
化疗疗效的关系

（n） 

组别	例数	CR	PR	SD	PD	有效率（%）
阳性表达	98	38	46	14	0	85.71
阴性表达	38	11	14	11	2	65.79

 注：2=5.76,p<0.05 
2.2 新辅助化疗前后Ki67表达与TNBC患者化疗疗效的关系
     化疗后，在疗效方面，A组> C组> D组> B组，差异有统计学意义（p<005），见表2。 

表2 新辅助化疗前后Ki67表达与TNBC患者
化疗疗效的关系

（n） 

组别	例数	CR	PR	SD	PD	有效率（%）
A组	67	28	31	4	0	88.061)2)3)
C组	31	10	15	10	0	80.651)2)
D组	24	6	11	7	0	70.831)
B组	14	5	3	4	2	57.14
f						6.12
p						<0.05

 注：与阴转阳比较，1)p<0.05；与阴性不变，2)p<0.05；与阳性不变，3)p<0.05 
2.3 化疗后Ki67表达与TNBC患者5年内生存情况的关系
     化疗后，A组TNBC患者5年内生存率为77.61%（52/67），B组患者生存率为61.29%（19/31），C组患者生存率为54.17%（10/24），D组患者生存率为42.86%（6/14），差异有统计学意义（p>0.05），见图1。 

图1 化疗后Ki67表达与TNBC患者5年内生存情况的关系 
3 讨论
     TNBC是较为常见的一种特殊型乳腺癌，主要临床表现有乳腺肿块、乳头溢液、皮肤卫星结节等症状，由于乳腺非维持机体生命活动的重要器官，不具备威胁患者生命安全的风险性，但随着病情的进展，可形成淋巴结并发生转移，累及其他重要器官和组织，严重影响患者的身心健康［11-12］。目前，化疗是治疗TNBC最常见的内科治疗手段，可有效通过抗癌药对癌细胞生命活动进行调控，抑制癌细胞的增殖和分化［13］。近年来，随着化疗技术的发展，新辅助化疗是一种新型的全身性化疗方式，对患者的疗效及预后具有更为良好的效果，但临床上采用新辅助化疗治疗的患者其疗效具有较为明显的差异，以致过度干预对患者造成多种不良反应，因此寻找具有指导意义的生物学指标是提高化疗疗效中重点关注的问题［14-15］。
     本研究通过检测新辅助化疗前后TNBC患者组织中Ki67表达情况，结果显示：化疗后，Ki67阳性表达患者有效率明显高于阴性表达患者。研究发现， Ki67抗原作为一种增殖细胞相关的核抗原，其功能与有丝分裂密切相关，仅在增殖细胞核中表达，其是细胞增殖过程中不可缺少的一种抗原，是一种较理想的检测细胞增殖活性的指标。因此在乳腺组织发生癌变时，由于癌细胞的异常、快速增殖，可致使核大量的增生，进而影响Ki67的表达，Ki67单克隆抗体标记G0后期、S期和G期、M期细胞核抗原，而 G0期、G0早期的细胞核不被标记，可作为一种较理想的检测细胞增殖活性的抗体，且由于Ki67抗原半衰期短，胞脱离增殖周期后迅速降解，可有效反映细胞的增殖活性，间接反映了BLBC癌变情况；因此，在给予患者新辅助化疗过程中，Ki67的表达水平可有效作为细胞增殖活性检测的敏感和重要指标，Ki67阳性表达提示机体对化疗治疗具有较高的敏感性，可作为预测新辅助化疗疗效的敏感预测指标。
     此外，研究发现，TNBC患者新辅助化疗后，Ki67表达由阳性转阴性患者有效率最高，阳性不变患者第二，阴性患者第三，由阴性转阳性患者有效率最低；在化疗后5年内，由阳性转阴性患者生存率最高，阳性不变患者第二，阴性患者第三，由阴性转阳性患者有效率最低；Ki67 的表达下降提示化疗有效抑制了患者癌细胞的增殖和分化，肿瘤细胞减少，化疗疗效和生存预后较好，医师应当持续性对患者进行化疗治疗，Ki67 的表达提示此类患者化疗疗效较差且可能伴有反作用，使肿瘤细胞增多，医师应当及时终止，而Ki67 的表达不变提示化疗对患者敏感性一般，医师应当结合或应用其他治疗方案，以提高患者的疗效和预后。因此在进行化疗治疗时，通过检测组织中Ki67表达情况，有助于医师对化疗疗效及预后水平进行评估，间接有利于制定针对性临床治疗方案，同时为指导BLBC的化疗提供重要的参考指标，避免无效或过度治疗对患者造成不良的影响，以提高对患者的治疗效果和生存预后水平。
     综上所述，新辅助化疗可导致TNBC患者Ki67的表达转变，Ki67的表达可能反映新辅助化疗对TNBC患者的疗效和预后，有助于医师制定合适的治疗方案，避免无效或过度治疗对患者造成不良的影响，但因此研究为回顾性研究，仍需前瞻性研究进一步证实。

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