抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值

黄银群 林秋强 陈绩才 陈 韧：澄海人民医院 广东澄海 515800

抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值

黄银群 林秋强 陈绩才 陈 韧
THE CLINICAL VALUATION IN THE DIAGNOSTIC OF SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS OF COMBINED DETECTION OF ANTI-DSDNA ANTIBODY, ANTI-SM ANTIBODY, ANTI-NUCLEOSOME ANTIBODY AND ANTI-RRNP ANTIBODY
HUANG Yinqun, LIN Qiuqiang, CHEN Jicai, et al 

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  【摘 要】 目的 探讨抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体联合检测在系统性红斑狼疮（SLE）诊断中的临床应用价值。方法 选取96例SLE患者;77例非SLE疾病对照组，包括类风湿关节炎（RA）46例，原发性干燥综合征(pSS)11例，系统性硬皮病(SSc)10例，其他结缔组织病(CTD)10例;30例健康人对照组。用间接免疫荧光法检测抗双链DNA抗体，用免疫印迹法检测抗Sm抗体、AnuA、抗rRNP抗体。结果 96例SLE患者抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体的敏感性分别为57%、23%、41%和30%，明显高于疾病对照组，差异有显著性（p<0.01），30例健康对照组检测结果全部为阴性。4种抗体检测的特异性分别为99%、100%、98%和96%,对疾病诊断特异性无明显改变(p>0.05)。4种抗体联合检测可提高对SLE阳性检出率，其检测敏感性可提高到86%；在41例抗dsDNA阴性SLE患者中抗Sm抗体阳性率为268%(11/41) 、AnuA阳性率为9.8%（4 /41）、抗rRNP抗体阳性率为31.7%(13/41)。结论 抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体在SLE的诊断有很高的特异性，敏感性各不相同，以抗dsDNA敏感性最高；4种特异性抗体在SLE诊断中有明显的互补作用，联合检测可提高对SLE的诊断水平，有利于SLE早期诊断、疗效观察以及病情监测追踪，具有重要临床意义。
  【关键词】 红斑狼疮,系统性,特异性抗体,敏感性

  【Abstract】 Objective To investigate the clinical application value of combined detection of anti-dsDNA antibody, anti-Sm antibody, anti-nucleosome antibody（AnuA） and anti-rRNP antibody in diagnosis of systemic lupus erythematosus (SLE) patients. Methods 96 cases of SLE patients were selected, with 77 cases of non-SLE disease in control group that consist of 46 rheumatoid arthritis (RA) patients, 11 primary Sjogren's syndrome (pSS) patients, 10 systemic scleroderma (SSc) patients and 10 other connective tissue disease (CTD) patients. 30 cases of healthy people were selected as control subjects for observation. The anti-dsDNA antibody was detected by indirect immunofluorescence assay (IIF); Western blotting was used to detect anti-Sm antibody, AnuA and anti-rRNP antibody. Results The sensitivity of anti-dsDNA antibody, anti-Sm antibody, AnuA and anti-rRNP antibody were 57%, 23%, 41% and 30% in 96 cases of SLE patients. They were much higher than those of control groups, and the difference was significant (p<0.01). 30 healthy controls were all negative. The specificity was 99%, 100%, 98% and 96%. The disease diagnosis specificity did not change obviously (p>0.05). Combined antibodies detection of those 4 kinds can increase the positive rate of SLE, and the detection sensitivity can be improved to 86%. In 41 anti-dsDNA negative cases of SLE patients, anti-Sm antibodies positive rate was 26.8% (11 of 41); AnuA positive rate was 9.8% (4 of 41); and anti-rRNP antibody positive was 31.7% (13 of 41). Conclusion The anti-dsDNA antibody, anti-Sm antibodies, AnuA and anti-rRNP have high specificity in SLE diagnosis, and the anti-dsDNA sensitivity was highest of the different sensitivity. 4 kinds of specific antibody with a complementary effect are obvious in the diagnosis of SLE. Combined detection may improve the diagnosis level of patients with SLE, including the early diagnosis of SLE, observation of curative effect and monitoring to the disease state tracking. It has important clinical significance.
     【Key words】  Lupus erythematosus,Systemic, Specific antibodies,Sensitivity
     【Author′s address】 Chenghai People's Hospital, Shantou, Guangdong, 515800, China
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.06.032

  系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）是以多系统、多脏器受累、以血管炎为临床特点的弥漫性自身免疫性疾病，在SLE发病过程中不仅有T细胞参与，同时伴有B细胞的高度活化，其血清可产生多种抗核抗体为免疫学特征的一种慢性炎症性结缔组织疾病。患者血清产生的抗核抗体可作用于不同的靶抗原，因而患者血清可出现各异的特异性抗核抗体，如抗双链DNA(Anti-double Stranded DNA，dsDNA)抗体、抗Sm抗体、抗核小体抗体（Anti-nucleosome Antibodies，AnuA）和抗核糖体抗体（又称抗rRNP， Anti-ribosomal RNP Antibodies，rRNP），这些抗体在SLE患者血清中可单一出现或同时出现，目前认为这些抗体对SLE诊断具有很高特异性，但敏感性各不相同。如果单一检测某一种特异性抗体，会对SLE造成漏诊，不利于早期诊断。临床上亟需一种对SLE诊断的特异性和敏感性均较为理想的血清学诊断指标，从而有利于SLE患者的早期诊治。近年来先后有文献［1-2］报道用几种抗体联合检测能提高SLE患者自身抗体的阳性率，但抗体组合各不相同。本研究用抗dsDNA抗体联合其他3种特异性抗体，在对疾病诊断特异性无明显改变，可提高对SLE患者早期诊断、病情鉴测和追踪，提高患者生存率和生活质量具有重要意义。
     1 资料与方法
1.1 研究对象
     选取首次来我院就诊免疫室血清库96例SLE患者血清，其中女92例，男4例，年龄14～65岁，平均320岁，病程1个月～10年，平均3年。诊断符合1997年美国风湿病学会修订的SLE分类诊断标准；疾病对照组77例，男12例，女65例，年龄3～77岁，平均500岁。其中包括类风湿关节炎(RA)46例，原发性干燥综合征(pSS)11例，系统性硬皮病(SSc)10例，其他结缔组织病(CTD)10例，诊断均符合各自的国际诊断标准。30例健康对照来自本院体检人员，晨间静脉抽血，经离心后留取血清。
1.2 实验方法
1.2.1 抗dsDNA抗体检测 由欧蒙公司的抗dsDNA检测试剂盒，以绿蝇短膜虫为底物，按试剂盒的说明书，应用间接免疫荧光法检测，在荧光显微镜下观察虫体的动基体有亮绿色荧光，血清≥1∶ 10稀释度显示荧光为阳性。
1.2.2 抗Sm、AnuA和抗rRNP抗体检测 由欧蒙公司的ANA谱1检测试剂盒，按试剂盒的说明书，应用欧蒙免疫印迹法检测，为减少人眼判读误差，用欧蒙配标准判读卡校准，用Canoscan扫描仪扫描判读，以1个+显色判为阳性。
1.3 统计学方法
     数据比较采用2检验，p<0.05具有统计学意义。
     2 结果
2.1 4种特异性抗体对疾病检测意义
     96例SLE患者抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体的敏感性分别为57%、23%、41%和30%，均明显高于疾病对照组（1.3%、0%、2.6%、5.2%），差别有统计学意义（p<001）,特异性分别为99%、100%、99%和96%,见表1。
2.2 抗dsDNA抗体联合其它3种特异性抗体检测敏感性比较
     用抗dsDNA抗体诊断SLE，其诊断敏感性为57%，联合抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体检测，在诊断特异性没有明显改变，其诊断敏感性明显高于单一抗dsDNA抗体检测，达到86%，差别有显著性差异(p<0.01)，而特异性无明显改变，差别无统计学意义(p>0.05),见表2。
2.3 抗dsDNA抗体与其他3种特异性抗体的关系
     在41例抗dsDNA抗体阴性的SLE患者中，抗Sm抗体阳性率为26.8%（11/41），AnuA阳性率为9.8%（4 /41），抗rRNP抗体阳性率为31.7%（13/41），以抗rRNP抗体检出率最高。在35例AnuA阳性同时伴抗dsDNA抗体阳性患者中，有29例抗dsDNA抗体滴度较高，在1∶ 40~1∶ 1 280之间。在17例抗rRNP抗体阳性同时伴抗dsDNA抗体阳性SLE患者中，有15例抗dsDNA抗体滴度较高，其滴度在1∶ 40~1∶ 640之间,见表3。

表1 96例SLE患者特异性抗检测结果

 

	例数	抗dsDNA+	抗Sm+	AnuA+	抗rRNP+
SLE	96	55	22	39	29
RA	46	1	0	0	3
pSS	11	0	0	2	0
SSc	10	0	0	0	0
其他CTD	10	0	0	0	1
健康对照	30	0	0	0	0
对SLE敏感性(%)		57	23	41	30
对SLE特异性(%)		99	100	98	96
疾病对照检出率(%)		1.3	0	2.6	5.2

 注：SLE特异性抗体敏感性与疾病及健康对照比较p<0.01

表2 抗dsDNA抗体联合其它3种特异性抗体检测敏感性比较

 

项目	阳性例数	敏感性(%)	特异性(%)
dsDNA	55	57	99
dsDNA+Sm	66	69	99
dsDNA+Sm+AnuA	70	73	97
dsDNA+Sm+AnuA+rRNP	83	86	93

 注：4种抗体联合检测与单一抗dsDNA抗体检测敏感性比较p<0.01，特异性之间比较p>0.05

表3 抗dsDNA与其他3种特异性抗体的关系

 

	抗Sm	AnuA	rRNP
	阳性	阴性	阳性	阴性	阳性	阴性
dsDNA+	11	44	35	20	17	38
dsDNA-	11	30	4	37	13	28

3 讨论
     自身免疫性疾病的特征，其血清以检出自身抗体为特征，如SLE患者血清可同时或单独存在不同性质的特异性抗核抗体，如抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体，这些抗体有些是SLE的特异性抗体，有些是SLE的标记性抗体，对SLE诊断和鉴别诊断具有重要意义［3］。抗dsDNA抗体是目前公认的SLE高度特异性抗体，被列为SLE诊断标准之一，抗体滴度高低与疾病的活动性及预后密切相关。本研究96例SLE患者血清中抗dsDNA抗体检测的敏感性为57%，与文献报道相符［4］，特异性99%。结果表明，抗dsDNA在SLE中检测敏感性高于其他3种自身抗体，而特异性与其他抗体无明显差别。进一步的临床资料研究发现，活动期SLE患者常表现抗dsDNA滴度升高，ESR增快，CRP正常或轻度增高(<30 mg/L)，即使并发严重感染，血白细胞也不一定升高。由此可见，结合CRP有助于鉴别SLE患者病情活动与感染有重要意义。
     抗Sm抗体的靶抗原位于细胞核内一组由核蛋白与RNA所构成的分子颗粒上，这组蛋白被称为小核糖核蛋白。抗Sm抗体对SLE的诊断具有高度特异性，是目前公认的SLE血清标记性抗体，抗Sm抗体检测对早期、不典型的SLE或经治疗缓解后的SLE回顾性诊断有很大帮助。本研究用欧蒙斑点免疫印迹技术，检测96例SLE患者血清中的抗Sm抗体，检测敏感性为23%，与文献报道接近［4］，疾病对照和健康对照抗Sm抗体全为阴性，其检测特异性为100%，与文献报道一致［5］。本研究结果表明，抗Sm抗体在SLE中检测敏感性虽然低于其他3种特异性抗体，但对SLE高度特异，是诊断SLE理想标记性抗体。
     核小体是真核细胞染色质基本重复结构的亚单位，对于细胞核中DNA的组成非常重要。核小体是SLE中致病性辅助性T淋巴细胞识别的自身抗原，不仅引起同源B淋巴细胞产生核小体特异性自身抗体，而且引起抗DNA抗体和组蛋白抗体的形成，是多种抗核抗体出现的根源。已经有资料研究显示，AnuA及抗dsaDNA抗体与SLE的病情活动性相关，特别是与狼疮肾损害密切相关，可以作为病情观察的指标［6-7］。本研究检测96例SLE患者血清中的AnuA，敏感性为41%，与疾病对照组比较差异有显著性(p<0.01)，特异性为98%，与文献报道接近［8］，但与胡学芳［4］等报道有所不同，其原因与采用的检测方法不同、以及ELISA法易产生非特异性吸附有关。进一步的临床资料研究发现，在35例AnuA阳性同时伴抗dsDNA抗体阳性患者中（表3），有29例抗dsDNA抗体滴度较高，在1∶ 40~1∶ 1 280之间，说明AnuA不仅是SLE特异性抗体，同时与SLE病情活动性密切相关。
     抗核糖体抗体，1985年ELKON及FRANCOAUR等分别首次报道在SLE病人血清发现该自身抗体，并认为该抗体为SLE特异性自身抗体。但未见有关文献报道抗rRNP抗体在SLE诊断价值的报道。本研究检测96例SLE患者血清中抗rRNP抗体，其检出敏感性为30%，与疾病对照组比较差异有显著性(p<001)，特异性96%，也是SLE高度特异性抗体之一。进一步的临床资料研究发现，在17例抗rRNP抗体阳性同时伴抗dsDNA抗体阳性SLE患者中，有15例抗dsDNA抗体滴度较高，其滴度在1∶ 40~1∶ 640之间，说明抗rRNP抗体常在SLE活动期中存在，有时不会随病情的缓解立即消失，可持续1～2年后才转为阴性。抗rRNP抗体更多出现在有严重精神病表现、特别是抑郁症的狠疮患者中。虽然文献中有争论，但在行为异常发作时，抗rRNP抗体效价的升高对狼疮精神病（狼疮脑病）的诊断有提示作用。本研究30例SLE患者血清抗rRNP抗体阳性，还没有发现精神异常表现，有待继续追踪和观察。
     SLE患者血清中可出现不同性质的特异性抗核抗体，如果只检测某种特异性抗体，不利于SLE早期诊断。进一步的临床资料研究发现，在抗dsDNA抗体阴性的SLE患者中可出现其他特异性自身抗体，而在其他每种特异性抗体阴性的SLE患者中，也可出现其他特异性抗体，但抗体的阳性率不一。本研究以抗dsDNA抗体联合抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体对96例SLE患者进行检测，其结果显示：在41例抗体dsDNA抗体阴性的SLE患者中，分别有4例AnuA抗体、11例抗Sm和13例抗rRNP抗体阳性，其阳性率分别为9.8%、268%和317%，可以弥补抗dsDNA抗体阴性的SLE患者的诊断，相互之间具有互补作用。因此，用抗dsDNA抗体联合抗Sm抗体、AnuA和抗rRNP抗体检测可提高对SLE检测的敏感性，其阳性检出率可提高到86%，与单一抗dsDNA特异性抗体检测比较，差别有显著性（p<0.01），而特异性没有明显的改变，差别无显著性（p>0.05）。
     综上所述，SLE患者血清可出现不同性质的特异抗体，这些抗体可单独或同时出现，具有不同的特性和临床应用，在患者血清中检出率也各不相同， 4种特异性抗体联合检测，在SLE诊断中有明显的互补作用，可提高SLE诊断水平，有利于SLE早期诊断、疗效观察以及病情鉴测追踪，具有重要临床意义。

参考文献
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