台山地区艰难梭菌毒素A/B检测在院外和院内感染的临床应用

基金项目：江门市新技术新项目（编号：江卫【2013】154号-13B044）
陈达富：台山市人民医院 广东台山 529200

台山地区艰难梭菌毒素A/B检测在院外和院内感染的临床应用

陈达富
CLINICAL APPLICATION OF CLOSTRIDIUM DIFFICILE TOXIN A/B DETECTION IN THE OUTSIDE HOSPITAL AND NOSOCOMIAL INFECTION IN TAISHAN AREA
CHEN Dafu

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  【摘 要】 目的 探讨艰难梭菌毒素A/B检测在台山地区院外和院内感染中的应用。方法 收集2013年5月~2014年10月528例刚入院腹泻患者的粪便标本作为院外感染可疑病例组（院外感染组），年龄段在8~75岁，男249例，女279例；收集同时间段523例住院超一周以上并使用抗生素3天以上的患者的粪便标本作为院内感染的可疑病例组（院内感染组），年龄段在7~74岁，男209例，女314例。分别进行艰难梭菌毒素A/B检测，并结合细菌培养结果、临床诊断和疗效进行综合统计学分析。结果 院外感染艰难梭菌率4%，院内使用抗生素后感染率16%。艰难梭菌毒素A/B检测对院外感染的检出率为85%，对院内感染的检出率为90%。结论 艰难梭菌毒素A/B检测对台山地区院外和院内感染检测快速准确，值得在临床上推广应用。
  【关键词】 艰难梭菌毒素A/B,院外,院内,感染

  【Abstract】 Objective To investigate the application of Clostridium difficile toxin A/B detection on the outside hospital and nosocomial infection in Taishan area.Methods The stool samples of 528 diarrhea patients newly admitted from May 2013 to October 2014 were collected as the outside hospital suspicious group, and the patients were aged 8 to 75 years old, including 249 males and 279 females. Relatively, the stool samples of 523 patients hospitalized more than a week and treated with antibiotics more than 3 days were collected as the nosocomial suspicious group, and the patients aged 7 to 74 years, 209 males and 314 females. Clostridium difficile toxin A/B was detected, and the comprehensive statistical analysis combined with thebacterial culture results, clinical diagnosis and curative effect was made. Results The clostridium difficile infection rate outside the hospital was 4% and the infection rate in hospital after using antibiotics was 16%. By Clostridium difficile toxin A/B detection, the positive rate of outside hospital infection was 85%, and that of nosocomial infection was 90%.Conclusion The Clostridium difficile toxin A/B detection is worthy of clinical application for its rapid and accurate outside hospital and nosocomial infection detection in Taishan area.
     【Key words】  Clostridium difficile toxin A/B,Outside hospital,Nosocomial, Infection
     【Author′s address】 Taishan People's Hospital, Taishan 529200, Guangdong Province, China
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.03.035

  艰难梭菌（Clostridium Difficile）是一种专性厌氧菌，约(1.3～1.6)μm×(3.6～6.4) μm，为革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，位于菌体近端至颈端有卵圆形芽孢，无荚膜［1］，是自然环境与人类消化道中存在的正常菌种。但在一定条件下可以转为致病菌。在临床工作中，当患者免疫力降低，我们会遇到艰难梭菌引起的院外感染；另外，在住院期间，由于免疫抑制剂或广谱抗生素滥用，可能导致艰难梭菌相关性腹泻（Clostridium Difficile Associated Diarrhea，CDAD）。目前，艰难梭菌感染的确诊依赖于检出艰难梭菌或艰难梭菌毒素。在台山地区，我院开展新技术艰难梭菌毒素A/B检测来评价艰难梭菌在台山地区院外和院内的感染情况，本研究结合艰难梭菌的培养和临床诊断结果探讨艰难梭菌毒素A/B检测技术的开展在诊断院外和院内感染的优越性。
     1 资料与方法
1.1 一般资料 
     收集2013年5月~2014年10月528例刚入院腹泻患者的粪便标本作为院外感染可疑病例组（院外感染组），年龄段在8~75岁，男249例，女279例；另收集同时间段523例住院超一周以上并使用抗生素3天以上的患者的粪便标本作为院内感染的可疑病例组（院内感染组），年龄段在7~74岁，男209例，女314例。分别对两组进行艰难梭菌毒素A/B检测（注：婴幼儿粪便可能干扰艰难梭菌毒素AB检测，因此，2岁以下幼儿大便不用此法检测）。
1.2 参考诊断标准 
     以环丝氨酸- 头孢西丁-果糖琼脂(CCFA)培养基在厌氧环境下培养到艰难梭菌,并符合美国感染病协会2010年版的CDI诊断标准包括：①有腹泻症状，24 h内排未成形便大于或等于3次；②大多数患者近8周内使用过抗生素；③粪便中检出产毒型Cd或Cd毒素，或结肠镜检或组织病理检查发现伪膜性肠炎［2］。
1.3 仪器试剂与实验原理 
     艰难梭菌毒素A/B检测仪器为法国梅里埃VIDAS自动化仪，试剂为仪器配套试剂盒。本实验应用的基本原理为酶联荧光（ELFA）:标本中的待检测物被固相管免疫捕获后，随后此免疫复合物吸附标记抗体，激活标记物，催化底物反应产生荧光，经测量得到一个定量结果。根据测试值，检测结果解释如下：①测试值<0.13为阴性。②测试值≥0.13 to<0.37为可疑。③测试值≥0.37为阳性。
1.4 统计学方法 
     本组数据采用SPSS 13.0软件进行处理，计数资料比较采用卡方检验，组间比较进行t检验，均以p<0.05为有统计学意义。
     2 结果
     艰难梭菌毒素A/B检测结果院内感染组明显高于院外感染组(p<0.05)。见表1。培养结果院内感染组明显高于院外感染组（p<0.05），其检验结果均符合临床诊断艰难梭菌毒素A/B对艰难梭菌感染的诊断总的特异性和灵敏度分别为99.5%和95.7%。见表2。

表1 院外感染组和院内感染组艰难梭菌
A/B毒素检测结果对比

（n,%）

组别	例数	A/B毒素检测结果
		阳性	可疑	阴性	阳性率
院外感染组	528	12	4	512	2.27
院内感染组	523	30	3	491	5.74

表2 院外感染组和院内感染组艰难梭菌
CCFA培养基培养结果

(n,%)

组别	例数	培养结果
		阳性	阴性	阳性率
院外感染组	528	14	514	2.65
院内感染组	523	30	512	5.74

3 讨论
     艰难梭菌(Clostridium Difficile)是造成抗生素相关腹泻及伪膜性结肠炎的病原菌［3-4］,可引起院外感染和院内感染。艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)发病有关的毒素是毒素A、B及二元毒素。毒素A为肠毒素，相对分子质量为308 000，对白细胞有趋化作用，可使肠壁出现炎症、渗出、出血及坏死，也有一定的细胞毒性作用，但小于毒素B。毒素B为细胞毒素，相对分子质量为269 000，可直接破坏肠壁细胞，导致伪膜形成［5］。患者一般腹泻多于1天4次水泻样便，多数有痉挛性腹痛。约半数腹泻出现应用抗生素过程中，或在停用抗生素后短期内，偶有停药数月后发病。重症出现消耗性腹泻，每日可达20~30次，症状包括腹泻、腹痛、发热、血白细胞增高、粪便有白细胞、中毒性巨结肠,CT检查可显示结肠增厚，内镜和活检检查可见结肠特征性改变，即存在散在、点状、黄、棕、绿色斑块,偶尔表现为急腹症及暴发性致死性结肠炎，腹部X线片可见麻痹性肠梗阻及“拇指纹”症,可并发肠穿孔、电解质紊乱等。
     由于广谱抗生素的使用，院外和院内感染艰难梭菌问题日益严峻，能否对患者及早作出诊断至关重要。目前，在基层医院对艰难梭菌的鉴定还是停留在培养的阶段，但培养方法存在检验周期长，往往耽误治疗，同时对院外和院内的感染难以进行筛查，所以在基层需要能快速诊断的方法。在我院开展免疫学方法酶联荧光（ELFA）检测艰难梭菌毒素A/B，收集在台山地区的病例，综合评价艰难梭菌毒素A/B检测在院外和院内感染的临床应用。从本研究可得到以下结论：①院内感染明显高于院外感染，艰难梭菌毒素A/B检测与培养结果在这方面相一致，由此可知艰难梭菌毒素A/B检测技术适用于院外和院内感染的筛查；②艰难梭菌毒素A/B检测对艰难梭菌感染比例的特异性和灵敏度分别达到995%和957%，基本和培养结果一致，达到临床的要求，而且检测周期短（1小时内可以出结果），成本较低，可以适用于在台山地区基层医院的开展。
     综上所述，免疫学方法酶联荧光（ELFA）检测艰难梭菌毒素A/B可应用于台山地区基层医院，对院外和院内感染艰难梭菌的患者提供重要的实验室诊断依据。
    

参考文献
［1］ 杨雪妹，吴允孚.艰难梭菌的生物学特性与实验室诊断［J］.中国感染与化疗杂志,2013,13(3):232-234. 
［2］ COHEN SH，GERDING DN，JOHNSON S，et al．Clinical practice guidelines for Clostridium difficile infection in adults：2010 update by the society for healthcare epidemiology of America(SHEA)and the infectious diseases society of America(IDSA)F［J］．Infect Control Hosp Epidemiol，20l0，31(5)：431-455．
［3］ 李影林．中华医学检验全书［M］．北京：人民卫生出版社，1996：1602-1603.
［4］ E BERGONE-BEREZIN．Treatment and prevention of antibiotic assoeiated diarrhea［J］．Internation Journal of Antimicrobial Agents，2000，16：521-526.
［5］ 胡云建,院内感染艰难梭菌相关性腹泻［J］.中国医学科学院学报,2008,30(5)：618-621.