HBeAg阴性慢性乙肝患者乙肝病毒大蛋白检测研究

伍尚剑 陈聚兴 谭宗宪 莫夏鹰 陈绍轩 欧学骞 ：怀集县人民医院 广东怀集 526400 

HBeAg阴性慢性乙肝患者乙肝病毒大蛋白检测研究

伍尚剑 陈聚兴 谭宗宪 莫夏鹰 陈绍轩 欧学骞
SIGNIFICANCE OF HBV-LP IN PATIENTS WITH CHRONIC HEPATITIS B 
WU Shangjian, CHEN Juxing, TAN Zongxian, et al 

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  【摘 要】 目的  通过检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)和HBV-DNA,探讨HBV-LP与HBV-DNA的关系,研究HBV-LP反映HBV复制情况的可靠性,揭示HBeAg阴性慢性乙肝患者检测HBV-LP的临床意义。方法  用酶联免疫吸附试验(ELISA)对HBV-LP和HBeAg进行检测;采用荧光定量PCR方法对HBV-DNA进行检测。结果  106个HBeAg阴性慢性乙肝患者HBV-DNA、HBV-LP的检测结果显示: HBV-LP的检测结果与HBV-DNA的检出结果差异无统计学意义(p>005)。HBV-DNA拷贝数的对数值与HBV-LP含量具有正相关关系,相关系数r=0.901。结论 HBV-LP能够反映出乙肝病毒的复制情况,血清中的HBV-LP与HBV-DNA具有较好的相关性,是反映HBeAg阴性乙肝患者病毒复制情况的新的血清免疫学指标。 
  【关键词】 慢性乙型肝炎 病毒 诊断 大蛋白 

  【Abstract】 Objective  To explore the relationship between HBV-LP and HBV DNA, to study the reliability of HBV-LP reflecting HBV replication and to discover the clinical significance of detecting HBV-LP in HBeAg negative CHB patients by examing HBV-LP, HBV-DNA in sera of HBeAg negative in CHB patients. Methods  HBV-LP and HBeAg were detected by ELISA while HBV-DNA by quantitative fluorescent PCR. Results  HBV-LP of 106 CHB patients were not statistically different from HBV DNA(p>0.05) . The HBV DNA of different HBV M patterns had no statistical significance from HBV-LP(p>0.05) at the same time. And the logarithmic value of HBV DNA copies correlated with contents of HBV-LP(r=0.917). Conclusion HBV-LP, which might reflect HBV replication and correlated closely with HBV-DNA, would be a novel immuno-serological index that might probably reflect the HBV replication of HBeAg negative CHB patients.
     【Key words】  chronic hepatitis B(CHB)；virus; diagnosis; large surface protein( HBV-LP) 
     【Author′s address】 Huaiji people's hospital, Zhaoqing, Guangdong, 526400, China
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.04.033 

  我国慢性乙型肝炎患者约占世界的1/3［1］，慢性乙型肝炎患者的治疗效果监测指标主要有 HBeAg阴转和HBV -DNA阴转以及临床肝功能改善等，目前HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者较多并且暂时没有有效监测指标。近年来研究表明，HBV-LP具有反式激活 HBV 细胞内复制的功能，与 HBV感染、病毒复制及预后均具有密切关系［2］，对HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者的疗效监测具有一定的临床意义。现对106例HBeAg阴性的慢乙肝患者血清HBV-LP、HBV-DNA 进行分析比较，旨在探讨将HBV-LP用于反映HBeAg阴性的慢乙肝患者HBV复制程度的可靠性以及其疗效监测的意义。现将结果报道如下：
     1 对象与方法
1.1 对象 选取106例于2013年1月~2014年9月期间在我院就诊的HBeAg阴性慢乙肝患者,其中男62例,女44例。年龄18~63岁,平均年龄39.6岁。所选取的病例均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中的慢性乙肝病毒性肝炎诊断标准。
1.2 检测方法 HBV-DNA实时荧光聚合酶反应(PCR)定量检测试剂盒，在ABI7500 型 荧光定量 PCR仪上进行检测；HBV-LP检测试剂盒，cu-t off 值为0.105。严格按照仪器和试剂说明书操作进行。结果判断按照HBV-LP 检测OD值＞0.105者为阳性，HBV-DNA＞103 IU/ml为阳性进行统计。
1.3 统计学分析 采用SPSS 17.0软件进行统计,计量资料组间差异采用2检验,计数资料组间差异采用方差分析。
2 结果
2.1 106例 HBeAg 阴性慢乙肝患者的HBV-LP和HBV-DNA的总阳性率 分别为67.9%(72例)和72.6%（77例），二者的检出率无明显差异， 现就HBV-LP及 HBV-DNA的相关性进行比较，见表1。 
 表1 实验组中HBV-LP及 HBV-DNA的相关性比较

（n） 

HBV-LP	HBV-DNA阳性	HBV-DNA阴性
阳性	52	20
阴性	25	9
合计	77	29

 注：相关性检验显示HBV-DNA与 HBV-LP之间存在正相关关系（r=0.628，p<0.05） 
2.2 HBV-DNA拷贝数对数值与HBV-LP阳性率之间的比较 见表2。 

表2 106例HBeAg阴性的慢性乙肝患者血清标本
HBV-DNA拷贝数与HBV-LP阳性率比较

 

HBV-DNA 拷贝数(IU/ml)	HBV-DNA 阳性例数(n)	HBV-LP 阳性例数(n)	HBV-LP 阳性率（%）
103	14	12	85.7
104	9	8	88.9
105	10	9	90
106	13	12	92.3
107	17	17	100
108	14	14	100
合计	77	72	93.5

 注：106例HBeAg阴性的慢乙患者血清标本中的HBV-DNA拷贝数对数值与HBV-LP阳性率的相关系数r=0.921 ,表明HBV-DNA拷贝数的对数值与HBV-LP阳性率具有相关性 
3 讨论
     目前我国慢性乙肝患者中HBeAg阴性者较多并且比例呈明显上升趋势，尤其在肝硬化患者中HBeAg阴性高达60%以上［3］, 其原因可能为HBV基因前C区或CP存在变异导致HBeAg合成障碍［4］和近年普遍使用抗病毒治疗而引起。慢乙肝患者的疗效监测指标主要有 HBeAg阴转和HBV -DNA阴转以及临床肝功能改善,但是对于HBeAg阴性的慢性乙肝患者除HBV-DNA外,暂时未有反映HBV复制程度的标志物或者疗效监测的指标，在临床上表现为HBeAg呈阴性而 HBV-DNA仍为阳性的情况较为多见,即血液中HBeAg虽为阴性但HBV仍有高水平、持续的再复制［5］。显然HBeAg阴性并不能作为判断HBV复制终止的理想依据。乙肝病毒S基因编码的表面大蛋白(Hepatitis B Virus Large Surface Protein ,HBV-LP)在空间上具有2种不同的跨膜构象,作为HBV的包膜蛋白,内侧可以和HBV核壳体膜结合,外侧可与病毒受体结合,是HBV颗粒成熟包装的关键［6］，检测HBV-LP对于慢乙肝患者的HBV –DNA复制情况和抗病毒治疗的疗效监测以及病情预后判断有一定的意义。
     本研究结果表明106例 HBeAg 阴性慢乙肝患者的HBV-LP和HBV-DNA的总阳性率分别为67.9%(72例)和72.6%（77例），二者的检出率无明显差异， HBV-LP 与HBV-DNA 之间存在正相关关系（r=0.628，p<0.05）。在106例 HBeAg 阴性慢乙肝患者中，HBV-DNA为阴性而HBV-LP仍有18.9%的阳性检出率，导致上述结果的原因可能为：①长期抗病毒治疗导致病毒基因变异可能造成HBeAg合成障碍血清，因而HBeAg的阴性结果不能说明乙肝病毒没有处于复制状态［7-8］；②有研究表明，血清HBV-DNA水平较低或HBV-DNA检测敏感度有限时，肝脏内仍旧可以存在一定量的HBV-DNA在持续复制，所以血清HBV-DNA阴性同样不是一定表明患者体内的HBV完全清除或不处于复制状态；③抗病毒药物只对病毒cccDNA的再复制有抑制作用,对已形成的病毒表达蛋白并无抑制作用,即以DNA为模板的转录和病毒蛋白的转译表达不受影响［3］，故肝内存在较多的cccDNA时可以导致血液中HBV-DNA检测阴性而HBV-LP检测呈阳性反应。综上所述，对于HBeAg 阴性慢乙肝患者来说，通过HBV-LP检测可了解体内病毒的复制、疾病进展情况以及抗病毒疗效与预后判断［9-11］，，可以弥补HBV-DNA检测对HBeAg 阴性慢乙肝患者患者抗病毒治疗终点判断及疗效评估中的不足，可以避免不必要的停药反跳，具有更好的临床指导意义，以减少更为严重的肝硬化及肝癌的情况发生。
     另外基于HBV -LP 的反式激活病毒复制功能, 这提示仅靠检测HBV DNA来评估抗病毒治疗效果以及判定疗效方面可能存在一定的局限性, 需要结合HBV-LP和HBV-DNA两者的检测结果以便对抗病毒治疗效果作出准确评估，本组研究资料表明, HBV-LP能反映HBV复制情况, 在106例 HBeAg 阴性慢乙肝患者中 HBV-LP含量与HBV-DNA拷贝数具有较好相关关系(r=0.921) ，即患者感染血清中HBV -LP与H BV-DNA检测阳性率有较高的符合率, 且HBV DNA拷贝数越高, HBV -LP 阳性率越高, 表明HBV-LP阳性检出是反映乙肝患者体内病毒复制情况的有效指标，这与国内学者的研究有相似点［12-14］，但是HBV-LP的残留与病毒持续复制或乙肝病毒慢性持续性感染相关性,有待进行进一步的深入研究。
     综上所述，笔者认为检测血清HBV-LP 可作为监测HBeAg阴性的乙型肝炎患者体内病毒复制、疾病进展及抗病毒治疗效果具有积极意义。

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