苦参水提物治疗湿疹豚鼠皮肤炎症的实验研究

基金项目：广东省医学科研基金（编号:A2014706）；广东省中医药局建设中医药强省立项资助项目（编号:20141007）；广东省医院药学研究基金（奥赛康基金）（编号:2015A02）；佛山市医学类科技攻关项目（编号:201308122）
陈 燕：广东省第二人民医院 广东广州 510317
张丽华：佛山科学技术学院组胚教研室 广东佛山 528000

苦参水提物治疗湿疹豚鼠皮肤炎症的实验研究

陈 燕 张丽华
EFFECTS OF SOPHORA FLAVESCENS EXTRACT ON SKIN INFLAMMATIONS OF GUINEA PIGS WITH ECZEMA
CHEN Yan, ZHANG Lihua 

---

  【摘 要】 目的 通过分析苦参水提物对湿疹豚鼠皮肤炎症肿胀度的抑制作用，并观察病理变化，探讨其抗炎作用，为临床治疗提供实验依据。方法 豚鼠40只，用2,4-二硝基氯苯在豚鼠颈背部涂抹致敏，在右耳内侧激发造模。随机分成5组，每组8只，分别作为模型对照组、阳性对照组、苦参提取液高、中、低浓度组，对湿疹部位皮肤连续涂抹给药14天，取双耳等面积的同部位，以左、右耳重量之差来评价皮肤炎症肿胀度。并取右耳组织块，HE常规染色，制作组织病理切片，观察其病理变化。结果 与模型对照组相比，苦参水提物高、中浓度组豚鼠皮肤肿胀度明显减轻 (p<0.05)，且真皮水肿和炎性细胞浸润情况明显改善（p<005）；与阳性对照组比较，苦参水提物高浓度组的豚鼠皮肤肿胀度、真皮水肿和炎性细胞浸润情况亦明显减轻(p<0.05) 。结论 苦参水提物能有效减少湿疹豚鼠皮肤的炎症反应，对于开拓湿疹的临床治疗方法具有一定的研究意义。
  【关键词】 苦参,湿疹,肿胀度,水提物,抗炎作用

  【Abstract】 Objective To investigate the inhibition of Sophora flavescens extract on the degree of inflammatory swelling of guinea pigs' skin with eczema, observe pathological changes and explore the effects of the anti-inflammatory action, in order to provide experimental basis for clinical treatment. Methods Eczema models of 40 guinea pigs were set up by smearing 2, 4-dinitrochlorobenzene on their napes to cause sensitization and motivating in the inside of their right ears. All guinea pigs were randomly divided into 5 groups equally，including the model compared group, positive control group and high, medium, low concentration groups of sophora flavescens. After eczema skin was continuously administered drugs for 14 days, the same part with equal area of the left and right ears was taken and weighed. The difference between the left and right ears was used to evaluate the swelling degree of skin inflammation. The pathological changes were observed by making pathological slices with HE staining with the tissue blocks of right ears. Results Compared with the model group, the swelling degree of skin inflammation was significantly relieved and dermal edema and inflammatory cell infiltrating were significantly improved in the high and medium concentration groups of sophora flavescens (p<0.05). Compared with the positive group, the swelling degree of skin inflammation, dermal edema and inflammatory cell infiltrating were significantly alleviated in the high concentration group of sophora flavescens (p<0.05). Conclusion Sophora flavescens extract can effectively reduce inflammatory response of guinea pigs' skin with eczema, having a certain significance for the clinical treatment of eczema．
     【Key words】  Sophora flavescens, Eczema, Swelling, Aqueous extract, Anti-inflammatory effect
     【Author′s address】 Guangdong NO.2 Provincial People's Hospital, Guangzhou 510317, Guangdong Province, China
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.05.008

  湿疹是一种由各种内外因素引起的过敏性炎症性皮肤病，临床上以皮肤丘疹、水疱、渗出、糜烂为主，呈多形性改变，易反复发病。其组织学特征为表皮细胞间水肿，伴有不同程度的棘层肥厚及浅表血管周围淋巴组织细胞浸润［1］。症见自觉性皮肤瘙痒，易引起睡眠紊乱，严重影响生活质量。目前湿疹治疗主要以糖皮质激素药物为主，需长期用药，不良反应较大［2］。近年来，中医药治疗对湿疹具有相当重要的作用，其疗效显著，不良反应少，受到皮肤科医生的重视［3］。
     苦参（Sophora Flavescens）是豆科植物苦参的根，含苦参碱、氧化苦参碱、槐花醇、金雀花碱等多种生物碱，具有抑菌、抗炎、抗过敏、调节免疫等多种药理作用［4-5］，主要用于治疗湿疹、瘙痒症等风热、湿热之皮肤病等病症，在治疗各种以变态反应为特征的皮肤炎症性疾病中取得较为明显的疗效［6-7］。因其具有清热燥湿、止痒安神的功效而历来为中医治疗皮肤病所推崇。本实验主要探讨苦参水提物对湿疹豚鼠皮肤炎症的影响，并观察皮肤肿胀度改变情况及其病理变化情况。
     1 材料与方法
1.1 实验动物
     纯白短毛豚鼠，雄性，体重(250±20)g，由广东省实验动物中心提供，实验动物合格证号：SCXK（粤）2013-0002。
1.2 仪器
     电子天平，BS-600L，友声衡器有限公司生产； 金属打孔器（6 mm），广州正宏医疗器械设备有限公司。
1.3 药品及试剂
     苦参（杏林药业有限公司，20131203）；复方醋酸地塞米松乳膏（东康药业有限公司，批号：130909）；2,4-二硝基氯苯（2,4-dinitrochlorobenzene ，DNCB）（上海试剂一厂，批号890901）；丙酮（AR，大茂化学试剂厂）。
1.4 方法
1.4.1 药物的制备 苦参水提物的制备：苦参饮片1 kg，加 5 倍水，浸泡 2 h，煎煮 1 h，过滤，药渣再加 3 倍水煎煮30 min，过滤，合并滤液浓缩至含生药5 g/ml。取适量含生药5 g/ml的苦参水提物，用纯水适当稀释，分别得到含生药2.5 g/ml，1.25 g/ml的苦参水提物。最后经热压灭菌后冷藏保存留用。
     致敏剂及激发溶液的制备：精密称取DNCB 2.5 g，用丙酮溶解，并定容到50 ml容量瓶中，制成5%的DNCB致敏溶液。取0.5%的DNCB致敏溶液1 ml，用丙酮稀释并定容到50 ml容量瓶中，制得0.1% DNCB激发溶液。
1.4.2 豚鼠湿疹模型的建立 建立40只豚鼠慢性湿疹模型。每只豚鼠颈背部剪毛2 cm×2 cm大小，5％DNCB溶液25 μl外涂致敏。2周后．每只豚鼠右耳内侧涂0.1％DNCB溶液100 μl作为激发。每周1次，连续4次。
1.4.3 实验分组、给药与取材 将湿疹模型豚鼠随机分为A、B、C、D、E五组，每组8只。于第4次激发72 h后，对上述各组进行湿疹部位皮肤涂抹给药治疗，每日2次。A组为模型对照组，给予生理盐水；B组为阳性对照组，按说明书给予复方醋酸地塞米松乳膏；C、D、E组分别为苦参水提物高、中、低浓度组，含苦参生药浓度分别为500 g/ml、2.50 g/ml和1.25 g/ml，分别按20、10和0.5 g/kg给药。各组均连续给药14天，随后停药1天，用直径6 mm的打孔器切下双耳等面积的同部位，精密天平称重。
1.4.4 观察指标
1.4.4.1 肿胀度和肿胀抑制率 以左、右耳片重量之差作为皮肤炎症肿胀程度评价指标，按下式计算各组肿胀度，并求出肿胀抑制率（%）。
     肿胀度= 炎症皮肤重量（右耳）-健康皮肤重量（左耳）
     抑制率（%） =（模型对照组肿胀度-药物组肿胀度）/ 模型对照组肿胀度 ×100%。
1.4.4.2 病理变化 用4%多聚甲醛固定右耳组织块，HE常规染色，制作组织病理切片，光镜下观察各组的病理变化。
1.4.5 统计学处理 用SPSS 13.0软件进行统计分析，数据用均数±标准差表示，多组之间的比较采用方差分析，p＜005为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 豚鼠慢性湿疹模型
     0.1％DNCB溶液第一次激发48小时后，右耳廓开始出现肿胀，与未激发的左耳相比，有明显区别，第二次、第三次激发后，肿胀增厚进一步加剧，并出现少许脱屑；第4次激发后右耳肿胀、增厚明显，表面出现结痂，与人慢性湿疹的临床表现相近似，表明造模成功。
2.2 肿胀度及肿胀抑制率
     与模型对照组相比，苦参水提物高、中浓度组豚鼠皮肤肿胀度明显减轻，差异有统计学意义 ( p＜0.05) ，与阳性对照组比较，苦参水提物高浓度组的豚鼠皮肤肿胀度明显减轻，差异有统计学意义 (p＜0.05) 。结果见表1。

表1 苦参水提物对2,4-二硝基氯苯所致豚鼠皮肤肿胀的影响

（±s，n=8）

组别	药物	肿胀度/mg	抑制率/%
模型对照组（A）	生理盐水	45.82±9.47	-
阳性对照组（B）	复方醋酸地塞米松乳膏	28.46±3.281)	37.89
高浓度组（C）	苦参水提物高浓度组（500 g/ml）	19.92±4.201)2)	56.52
中浓度组（D）	苦参水提物高浓度组（2.50 g/ml）	27.33±5.171)	40.35
低浓度组（E）	苦参水提物高浓度组（1.25 g/ml）	35.15±7.33	23.29

 注: 各组与模型对照组比较，1)p＜0. 05；与阳性对照组比较，2)p＜0. 05
2.3 病理切片观察结果
     模型对照组：组织被覆复鳞状上皮，表面可见厚层角化物，上皮表层角化不全或角化过度，颗粒层、棘层增厚，真皮水肿伴炎细胞浸润，符合皮肤湿疹改变，表明湿疹模型造模成功；高浓度组、中浓度组及阳性对照组病理切片可见：真皮水肿消退，炎性细胞浸润明显减少，尤其是高浓度组真皮内炎症改善最明显（p＜0. 05）；与模型对照组相比，低浓度组真皮水肿及炎性细胞浸润改善不明显（p＞0. 05）。
     3 讨论
     治疗湿疹目前常用的药物有皮质类固醇激素、组胺拮抗类、钙剂、维生素等，它们控制湿疹症状效果良好，但停药后易复发，且不良反应较多。苦参及其总生物碱治疗急性、亚急性湿疹用药安全，无抗组胺药物的嗜睡及皮质激素的不良反应，具有广阔的开发前景［4］。苦参性味苦、寒，归心、肝、胃、大肠、膀胱经，具有清热燥湿、祛风杀虫止痒之功效，历来为中医治疗皮肤病所推崇。其有效成分苦参碱和氧化苦参碱，易溶于水，是苦参水提物的主要成分，具有抗炎作用，可降低过敏介质的释放，具有免疫抑制作用［8-9］，还能杀灭和抑制体表多种细菌和真菌生长［10］，还可诱导视网膜母细胞瘤细胞SM-106凋亡［11］，具有抗肿瘤作用，与顺铂联合使用，在增加抑瘤作用的同时，可适度减少顺铂的副作用［12］，肝癌肝动脉化疗栓塞后使用苦参素能明显改善患者肝功能及免疫功能［13］，故现在临床中亦用于肿瘤、恶性胸腔积液［14-15］等。
     现阶段研究关于湿疹的报道却多见于疗效报道，本实验利用经典的豚鼠湿疹模型对苦参水提物抗湿疹药理作用进行了评价。与模型对照组相比，苦参水提物高、中浓度组豚鼠皮肤肿胀度明显减轻（p<0.05），且真皮水肿和炎性细胞浸润情况明显改善（p<0.05），与阳性对照组比较，苦参水提物高浓度组的豚鼠皮肤肿胀度、真皮水肿和炎性细胞浸润情况亦明显减轻（p<0.05），其效果优于复方醋酸地塞米松乳膏。因此，苦参水提物对豚鼠湿疹模型有明显的改善作用，值得进一步深入研究，为以后开发采用中药苦参治疗湿疹的外用制剂提供依据。

参考文献
［1］ 谢富军,何 栋,蔡 飞,等.湿疹的研究现状［J］.按摩与康复医学,2011, 2 (11): 23-24.
［2］ 王玉文,蒙秉新.糖皮质激素降阶梯疗法治疗慢性湿疹临床疗效观察［J］.临床皮肤科杂志, 2011,40(5):303-305.
［3］ 陈 平,杨志波,杨光艳,等.外用中药治疗慢性湿疹研究进展［J］.中华中医药学刊,2012, 30(3):524-527.
［4］ 徐国红.苦参治疗湿疹的药理作用研究［J］.长春中医药大学学报,2010,26( 10) :781.
［5］ 陈 静,梁生旺.苦参的成分及质量分析研究进展［J］.广东药学院学报,2012,28(5):569-572.
［6］ 吴伟明,孙忠敏,陈丽佳,等.苦参不同提取液对慢性湿疹治疗效果的研究［J］.中华中医药学刊,2012,30(3):650-652.
［7］ 张冰凌.苦参等中药在皮炎湿疹类皮肤病治疗中的应用［J］.中医临床研究,2013,5(10):87-88.
［8］ 刘 梅,刘雪英,程剑锋.苦参碱的药理研究进展［J］.中国中药杂志,2003,28(9): 801-803.
［9］ 黄秀梅,李 波.氧化苦参碱对TNF-α、IL-6 和 IL-8 的影响［J］.中成药,2003,25(11): 903-906.
［10］ 刘 婧.苦参汤联合马应龙麝香痔疮膏治疗肛周湿疹60例［J］.实用中医药杂志,2013,29(10):820.
［11］ 邱海江,袁穗蓉,张 柳.氧化苦参碱对视网膜母细胞瘤细胞凋亡的诱导作用及机制［J］.广州医药,2015,46(1):52-54.
［12］ 闫晓方,薛天阳,许伟高,等.苦参碱与其联合顺铂对U14荷瘤小鼠抑制作用的研究［J］.中国医药科学,2012,2(7):34-36.
［13］ 仲 炜,唐 成,武鲍鹰.苦参素对肝癌肝动脉化疗栓塞后肝脏及免疫功能保护作用的研究［J］.中国现代医生,2013,51(25):99-100.
［14］ 仰 杰,朱德良.艾迪与复方苦参联合GP化疗方案治疗非小细胞肺癌的临床观察［J］.中国当代医药,2014,21(8):73-75.
［15］ 蒋 剑.复方苦参注射液联合顺铂治疗恶性胸腔积液的临床效果［J］.中国当代医药,2014,21(26):113-115.