耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌耐药性分析及产金属酶检测

欧佳美 黄显武 胡秋蓉：汕尾逸挥基金医院 广东汕尾 516600

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌耐药性分析及产金属酶检测


欧佳美 黄显武 胡秋蓉
CARBAPENEM-RESISTANT ACINETOBACTER BAUMANNII RESISTANCE ANALYSIS AND METAL ENZYME PRODUCTION ASSAYS
OU Jiamei, HUANG Xianwu, HU Qiurong

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  【摘 要】 目的 研究碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌耐药性及其产金属酶情况。方法 收集2013年1月~2014年1月医院分离的鲍曼不动杆菌株；药敏试验采用K-B法，金属酶检测采用CAZ-EDTA协同试验。结果 共检出鲍曼不动杆菌68株，主要来自ICU、消化内科、急诊病区等科室。其中耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌30株（44%），耐药菌中对哌拉西林、头孢唑肟、氨曲南、复方新诺明、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢曲松、环丙沙星、头孢他啶和哌拉西林/他唑巴坦>90%耐药；耐药菌和非耐药菌对阿米卡星和妥布霉素均<50%耐药；30株耐药株产金属酶的有5株（16.7%）。结论 耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药率维持较高水平；且主要集中在ICU；产金属酶是其对碳青霉烯类抗菌药物耐药的重要机制之一，应加强对临床产酶株的检测，加强临床抗生素的管理，指导临床合理使用抗菌药，减少耐药株的产生。
  【关键词】 鲍曼不动杆菌,碳青霉烯类,金属酶,耐药性
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.02.009

  鲍曼不动杆菌是重要的医院感染条件致病菌之一。其生存力强、定植率高、耐药性强，极易造成院内感染的暴发流行［1］。碳青霉烯类抗生素是当前治疗鲍曼不动杆菌感染的最有力的药物之一，但是随着它的广泛应用，其耐药率也有继续上升趋势，甚至出现泛耐菌株的流行，给严重感染患者带来了极大的威胁。因此，了解我院鲍曼不动杆菌的耐药情况及其产金属酶的分析，为临床医师合理应用抗菌药物、控制细菌耐药性的发展提供参考依据。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 68株鲍曼不动杆菌均来自我院2013年1月~2014年1月期间临床送检的各类标本，包括痰液、血液、分泌液和尿液等标本；同一患者相同部位多次分离的同一菌株不重复计入。
1.2 材料 血平皿、巧克力平皿、麦康凯平皿、M-H平皿均购自梅里埃（上海）生物制品有限公司；药敏纸片购自天和微生物试剂有限公司；细菌鉴定卡购自bioMerieux；质控菌株为金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）、大肠埃希菌 （ATCC 25922）、铜绿假单胞菌 （ATCC 27853）标准株均购自广东省临床检验中心。
1.3 仪器 细菌鉴定仪为梅里埃VITEK 2-Compact全自动微生物鉴定分析仪；5%CO2培养箱为YCP系列5%CO2培养箱（生产厂家：华曦电子科技有限公司）；普通培养箱为数显电热培养箱（生产厂家：锦屏仪器仪表有限公司通州分公司）。
1.4 方法
1.4.1 细菌培养、鉴定和药敏 培养按全国临床检验操作规程(3版)［2］进行接种培养；鉴定采用VITEK 2-Compact全自动微生物鉴定分析仪进行鉴定，药敏分析采用K-B纸片扩散法，操作和结果按美国临床实验室标准化委员会（CLSI）的标准。
1.4.2 金属β-内酰胺酶的表型检测 采用纸片协同法；在MH平板上涂布0.5麦氏单位待测细菌的菌液；贴上两张亚胺培南纸片；两纸片相距4 cm；在其中一个亚胺培南纸片的旁边贴上一张空白纸片；两纸片相距1.5~2.5 cm, 在空白纸片加3 μl 2-巯基丙酸原液, 35 ℃培养18~24 h；若靠近2-巯基丙酸纸片旁边周围出现抑菌效果增强或两纸片之间出现协同敏感区；判断为产MBLs。
1.4.3 统计学方法 所有数据均用 SPSS 11.5软件包进行分析, 细菌耐药率统计, 采用百分率; 耐药率的比较采用2检验。以p<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 68株鲍曼不动杆菌中检查30株耐碳青霉烯类
     68株主要来自ICU、消化内科、急诊病区等科室；其构成比见表1。

表1 68株鲍曼不动杆菌及30株耐碳青霉
烯类科室来源表

［±s,n(%)］

科室名称	总数/n	非耐碳青霉烯菌株数	耐碳青霉烯菌株数
ICU	20	5（25）	15(75）
急诊病区	13	10（77）	3（23）
消化内科	11	4（36）	7（64）
肿瘤科	6	4（67）	2（33）
心血管内科	5	5（100）	0（0）
颅脑外科	3	1（33）	2（67）
老年科	3	3（100）	0（0）
骨科	2	2（100）	0（0）
普通外科	2	1（50）	1（50）
儿科	2	2（100）	0（0）
肾内科	1	1（100）	0（0）
合计	68	38（56）	30（44）

2.2 耐碳青霉烯类组和非耐碳青霉烯类组其它抗菌药物耐药率比较
     对耐药菌和非耐药菌进行分组采用2检验分析；其中复方新诺明、妥布霉素、环丙沙星、庆大霉素和左氧氟沙星具有统计意义（p<0.05）。

表2 耐碳青霉烯类组和非耐碳青霉烯类组
其它抗菌药物耐药率比较

(%)

抗菌药物	耐碳青霉烯类组 （n=30）	非耐碳青霉烯类组 （n=38）	2	p
哌拉西林	100.0	94.7	0.31	>0.05
阿米卡星	6.6	2.6	0.4	>0.05
头孢唑肟	96.7	86.8	0.98	>0.05
氨曲南	93.3	81.6	1.12	>0.05
复方新诺明	96.7	23.7	36.22	<0.01
妥布霉素	50.0	15.8	9.19	<0.01
头孢噻肟	96.7	86.8	0.98	>0.05
头孢曲松	100.0	84.2	3.42	>0.05
头孢吡肟	96.7	84.2	1.63	>0.05
环丙沙星	100.0	42.1	25.68	<0.01
庆大霉素	66.6	13.2	20.65	<0.01
头孢他啶	90.0	78.9	0.81	>0.05
左氧氟沙星	76.6	18.4	23.07	<0.01
哌拉西林/他唑巴坦	96.7	84.2	1.63	>0.05

2.3 MBLs检测结果
     30株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌有产金属酶的有5株，占16.7%。
     3 讨论
     鲍曼不动杆菌已成为我国院内感染的主要致病菌之一。根据2010年中国CHINET 细菌耐药性监测网数据显示，我国10省市14家教学医院鲍曼不动杆菌占临床分离革兰阴性菌的16.11％，仅次于大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌。而碳青霉烯类抗生素是目前临床应用最广泛、 抗菌活性最强大的抗生素之一。随着该药的广泛使用，已出现碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌。对碳青霉烯类耐药, 就意味着对现有的常用β-内酰胺类耐药，甚至出现泛耐株引起的感染，泛耐株常常无药可用，病死率高［3］。
     本研究发现我院耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的阳性率高达44%，而其中主要集中在ICU,有15例占50%，这主要与ICU患者病情较重、抵抗力差有关［4］；有研究发现，年龄、混合感染、机械通气、碳青霉烯类抗菌药物及合并慢性阻塞性肺疾病是多重耐药鲍曼不动杆菌感染的独立危险因素［5］；通过药敏分析我院耐药菌中耐药率最低的是阿米卡星（66%）和妥布霉素（500%）；而非耐药菌耐药率最低的也是阿米卡星（26%）和妥布霉素（158%），其主要原因可能与我院临床医生少用这两种药物有关；耐药菌株中对哌拉西林、头孢唑肟、氨曲南、复方新诺明、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢曲松、环丙沙星、头孢他啶和哌拉西林/他唑巴坦耐药率高达90%以上，对妥布霉素、庆大霉素和左氧氟沙星耐药率也有50%~80%；而非耐药菌只有哌拉西林耐药率在90%以上，耐药率低于50%有阿米卡星、复方新诺明、妥布霉素、环丙沙星、庆大霉素和左氧氟沙星6种；通过分耐药组和非耐药组统计分析，除了复方新诺明、妥布霉素、环丙沙星、庆大霉素和左氧氟沙星具有统计学意义（p<001），其他均无明显差别；综合表2分析,我院对治疗耐碳青霉烯类菌引发的感染十分棘手,耐药率低于50%且具有统计学意义的只有妥布霉素，这可能与临床医师预防性使用广谱抗生素比例过高,造成多重耐药菌株出现有关。因此，加强抗生素管理，防止抗生素滥用，特别是广谱抗生素的滥用，对减少或延缓耐碳青霉烯类菌株的产生是至关重要的［6］。
     金属酶(MBL )是最大的一种能够水解碳青酶烯类抗菌药物的β-内酰胺酶, 并且能使细菌对青霉素、头孢菌素类和碳青酶烯类药物广泛耐药，其耐药基因由染色体或质粒介导，获得性MBL主要分布于铜绿假单胞菌和不动杆菌属中，可通过转座子、质粒或Ⅰ类整合子等造成扩散［7-8］；且产金属酶是其对碳青霉烯类抗菌药物耐药的重要机制之一［9］；本研究显示30株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中有5株产金属酶，检出率为167%，由于产金属的酶菌株易引起医院感染暴发流行，因此, 临床微生物实验室应加强金属酶的检测。
     综上所述，鲍曼不动杆菌对多种药物的耐药率高，且易出现耐碳青霉烯类，其耐药机制复杂又易引起医院感染暴发流行［10］，因此，我们应重视其耐药机制研究，加强金属酶的临床检测，密切监测耐药株的变迁和发展，减少耐药菌株的出现和扩散。指导临床合理，谨慎地使用碳青酶烯类抗菌药物。

参考文献
［1］ TURTON JF, KAUFMANN ME, WARNER M, et al. A prevalent, multiresistant clone of Acinetobacter baumannii in southeast England［J］. J Hoap Infect,2004,58(3):170-179.

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［2］ 叶应妩,王敏三,申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京:东南大学出版社,2007:801-880.
［3］ 陈佰义,何礼贤,胡必杰,等.中国鲍曼不动杆菌感染诊治与防控专家共识［J］.中国医药科学,2012,2(8):3.
［4］ 吕春梅,莫韶妹,马洁葵,等. 综合重症监护室多重耐药鲍曼不动杆菌的控制［J］.现代医院,2012,12(4):100.
［5］ 林建青.ICU多重鲍曼不动杆菌感染的流行病学调查及耐药性研究［J］.中国现代医生,2012,50(30):8-10.
［6］ 余 琳,苏丹虹,江凤茹,等.多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因分析与同源性分析［J］.实用医学杂志,2013,29(12):2018-2021.
［7］ CASTANHEIFA M,TOLEMAN M A,JONES R N,et al. Molecular characterization of a beta-lactamase gene, blaGIM-1,encoding a new subclass of metallo-beta-lactamase ［ J］.Antimicrob Agents Chemother,2004,48:4654-4661.
［8］ LEE K, Y UM JH, YONG D, et al. Novel acquired metallo-betalactamase gene, blaG I M-17, in a class 1 integron from Acinetobacter baumannii clinical isolates from Korea［J］. Antimicrob Agents Chemother,2005,49:4485 -4491.
［9］ 张 琼.泛耐药鲍曼不动杆菌耐药机制研究进展［J］.中国医药导报, 2012,9(8):13-14.
［10］ 钟海波,伍哓锋,曾 瑜,等.多重耐药鲍曼不动杆菌ERIC-PCR的分子流行病学研究［J］.现代医院,2013,13(12):19-22.