TRPV1基因过表达逆转录病毒载体的构建和鉴定

【作者】 卢俊; 琚幼婷; 陈受琳; 李昌; 蔡俊赢; 徐国海;

【Author】 LU Jun;JU Youting;CHEN Shoulin;The Second Affiliated Hospital of Nanchang University;

【机构】 南昌大学第二附属医院;

【摘要】 目的 TRPV1基因过表达逆转录病毒载体的构建和鉴定研究。方法 PCR法扩增TRPV1基因的编码序列,克隆到pBaBe-puro载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用磷酸钙法制备pBaBe-puro-TRPV1逆转录病毒,将其感染到U87-MG细胞,经嘌呤酶素筛选阳性克隆后用荧光定量PCR和Western blot法检测TRPV1表达。结果经DNA测序和酶切鉴定表明,pBaBe-puro-TRPV1表达载体构建成功。pBaBe-puroTRPV1逆转录病毒感染U87-MG细胞后,细胞中TRPV1表达量明显增高。结论成功构建了人TRPV1基因的pBaBe-puro-TRPV1表达载体。pBaBe-puro-TRPV1能有效上调TRPV1基因在U87-MG细胞中的表达,为应用其研究TRPV1在利多卡因致细胞损伤中的作用奠定了基础。

【关键词】 瞬态电压感受器阳离子通道; 利多卡因; 逆转录病毒;

【基金】 国家自然科学基金(编号:81260176)

【所属期刊栏目】 专业技术篇_实验与应用研究 (2016年06期)

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