乳腺癌PRL-R表达阳性随年龄变化规律探究

基金项目：广东省教育厅创新训练项目资助(编号: 201410570039）
谢晓慧 崔银星 游紫聪：广州医科大学第三临床学院 广东广州510182
廖志伟：中山大学肿瘤防治中心 广东广州 510060
郑荣辉：广州医科大学附属肿瘤医院 广东广州 510095
通讯作者：郑荣辉


乳腺癌PRL-R表达阳性随年龄变化规律探究


谢晓慧 崔银星 游紫聪 廖志伟 郑荣辉
VARIATION OF PRL-R EXPRESSION POSITIVE BREAST CANCER WITH AGE
XIE Xiaohui, CUI Yinxing, YOU Zicong, et al

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  【摘 要】 目的 探讨乳腺癌原发灶PRL-R表达阳性随年龄变化的规律。方法 收集中山大学肿瘤防治中心行手术治疗的129例乳腺癌患者，中位年龄46岁。采用免疫组化法配合单克隆抗体检测各病例术后原发灶标本蜡块中PRL-R的表达状况，并分析PRL-R表达阳性随患者年龄的变化规律。结果 129例患者中PRL-R阳性表达88例，阳性率682％。以每5岁作亚单元计算PRL-R阳性率的结果显示出35岁和55岁两个重要变化节点，以此两个年龄节点将129例患者分成年龄递进三个亚组，Spearsman秩相关分析显示出PRL-R表达阳性与年龄增长总体呈负相关（r＝-0183，P<005），且36～55岁组患者PRL-R阳性率高于>55岁组患者（2＝8016，P=0005）。结论 总体上PRL-R表达阳性与患者年龄增长呈负相关，其变化规律大致为：35岁后PRL-R表达阳性率可见增高趋势，然后于55岁左右又快速降至较低水平。
  【关键词】 乳腺癌,泌乳素受体（PRL-R）,年龄,规律,R7379
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.12.013 

  乳腺癌发病在我国成增长趋势，每年以2％～3%速度递增［1］。文献报道约70%人类乳腺癌组织表达泌乳素受体（PRL-R），其结合泌乳素（PRL）后所介导生物学效应能促进乳腺癌的发生和进展［2-6］。目前文献表明PRL-R与与肿瘤分期等预后因素相关，提示了PRL-R的直接预后价值，而基于抗PRL-R机理的抗癌新药研究也获得喜人的初步结果。在PRL-R表达与患者年龄关联性研究方面，目前有关文献均未见报道阳性结果［7-10］。此结果支持PRL-R跟患者年龄不存在相关性？还是其相关性颇为复杂以致简单的分层研究无法让其得以显示？笔者就此展开深入探讨，现报道如下。
     1 资料与方法
1.1 一般资料
     回顾性收集2000年1月～2001年6月中山大学肿瘤防治中心行手术治疗的129例乳腺癌患者（要求其年龄不小于18岁且不超过75岁），选取其术后病理蜡块作研究对象。129例患者年龄26~75岁，中位年龄46岁，已绝经及未绝经分别为49和80例。按照WHO乳腺肿瘤组织学分类标准：浸润性导管癌118例，早期浸润性导管癌5例，其它类型癌6例。
1.2 试剂与设备
1.2.1 主要试剂 鼠抗PRL-R单克隆抗体和LSAB试剂盒（为SP－9000通用型试剂盒，包括：正常山羊预稀释血清,生物素化鼠/兔免疫球蛋白预稀释液,链球菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液，均为ZYMED公司产品。
1.2.2 其它试剂 001 ml/L枸橼酸缓冲液、缓冲液PBS、3%H2O2溶液和DAB显色剂等。
1.2.3 主要设备 切片机，硅化玻片恒温水箱，电冰箱，隔水式电热恒温箱，光学显微镜等。
1.3 实验方法
     采用免疫组化LSAB法检测每例患者术后标本中PRL-R表达。大致过程如下：①切片：每张片厚为6 μm；②脱蜡：于60 ℃温箱烤片2 h后用新鲜二甲苯、95％及70%酒精行脱蜡过程；③抗原修复：将切片浸泡在已预热至100 ℃的001 M枸橼酸缓冲液（PH 80）中，保持20 min；室温静置20 min；取出放入蒸馏水中浸泡3 min；④滴加A液（3％H2O2）。⑤滴加B液（正常血清）；⑥滴加一抗-抗PRL-R单克隆抗体，浓度为1∶ 50；⑦滴加C液（生物素标记的第二抗体）；⑧滴加D液（辣根酶标记的链霉卵白素）；⑨DAB显色：倾去D液，PBS（001 M PH 74）浸泡5 min×3次。向切片滴加新鲜配制的足以盖满整张组织切片的DAB显色溶液10 min；⑩苏木素复染：流水充分冲洗，切片浸入苏木素溶液中浅染约30 s；烤干切片，中性树胶封片，留待观察。
1.4 结果判断
     PRL-R表达定位于细胞浆，以胞浆内出现黄色至深棕黄色颗粒定义为PRL-R阳性细胞。由不了解临床资料且有丰富经验的病理医师在光学显微镜下通观整张切片，若PRL-R阳性癌细胞占总体癌细胞比率≤10％定义为“阴性表达”，>10％定义为“阳性表达”。
1.5 统计学分析
     采用SPSS 130 for Windows统计软件包分析数据，采用2检验或Spearsman秩相关分析探讨乳腺癌PRL-R表达阳性与患者年龄的关系，以P<005定义为有显著统计学意义。
2 结果
     129例患者中PRL-R阳性表达88例，阳性率为682％。考虑到PRL-R与年龄之间关系可能较为复杂，我们采取更为细致的分层方法；在35~65岁样本量较大的区间内每5岁为一个亚组进行分层，结果发现，在≤35岁升至36~40岁亚组，PRL-R阳性率由636%升至789%（实际值升高达153%）；而36~55岁区间内，随年龄增长每组之变化均不超过8%，属无明显变化年龄段；而从51～55岁至56～60岁组，PRL-R阳性数值由818%急剧降低至500%，降幅达318%；最后，在超过56～60岁后的患者中，PRL-R表达阳性率似乎却变化不明显，见表1和图1。由此可见，PRL-R与年龄的关系趋向是先增高后降低的复杂关系，且主要以35岁和55岁为关键变化节点。
     鉴于上述年龄亚层PRL-R表达情况，我们以35、55岁作为年龄节点将129例患者分成三组（见表2），Spearsman秩相关分析r＝-0183，P＝0037<005，显示出PRL-R表达与年龄间的总体的负相关性。另外，36～55岁组PRL-R阳性率也高于>56岁组患者（2＝8016，P=0005）。
     此外，考虑到乳腺癌临床预后常用年龄分组节点为35和50岁，本研究还依此年龄节点将129例患者分为≤35岁、35～50岁和>50岁三个年龄递增的亚组（见表2），采用Spearsman秩相关总体分析却未见PRL-R表达与年龄存在相关性（r=-0129，P=0144）。另外，35～50岁亚组PRL-R表达阳性率也高于>50岁亚组患者，但其2=4008小于上述依照55岁节点分组的8016，P=0045则大于上述依照55岁节点分组的0005。

 

图1 不同年龄亚组PRL-R表达阳性率（%）
   表1 不同年龄亚组PRL-R表达阳性率情况

(n,%)

年龄	亚组 例数	PRL-R 阳性例数	PRL-R 阳性率
≤35岁	11	7	63.6
36～40岁	19	15	78.9
41～45岁	28	20	71.4
46～50岁	29	22	75.9
51～55岁	11	9	81.8
56～60岁	14	7	50.0
>60岁	17	8	47.1

表2 亚组合并后的分析结果

(n,%)

合并方式	年龄	亚组例数	PRL-R 阳性例数	PRL-R 阳性率	r	P
35/55岁	≤35岁	11	7	63.6	-0.183	0.037
	36～55岁	87	66	75.9
	>56岁	31	15	48.4
35/50岁	≤35岁	11	7	63.6	-0.129	0.114
	35～50岁	76	57	75.0
	>50岁	42	24	57.1

3 讨论
     人类PRL-R是一种单链透膜蛋白，是人类一些恶性肿瘤发生和进展的促进因素，如乳腺癌、前列腺癌和宫颈癌等［2］。PRL-R在约70％人类乳腺癌组织有见表达，其结合PRL后激发多种透膜信号转导途径，引发生物学效应能增进乳腺癌细胞增殖、侵袭和逃离免疫杀伤的能力，进而促进乳腺癌的发生和进展［2-6］。探究PRL-R阳性与患者年龄间的关系，有助于为PRL-R预后及抗PRL-R治疗相关研究的提供更多的参考依据。
     在PRL-R表达与患者年龄关联性研究方面，目前有关文献均未报道阳性结果，提示了PRL-R表达与患者年龄可能不存在相关性，其中WASEDA、DE PLACIDO、BONNETERE采用RBA法，而GILL采用免疫组化法［7-10］。无阳性发现状况之持续，致使这方面研究开展愈见稀少。然而，乳腺癌PRL-R表达阳性与患者年龄间的相关性可能不是单一随年龄增加而递增或递减的简单关系，简单的分析方法可能难以揭示问题的真相。因此，在该问题上研究需先将患者年龄进一步分割成更细的小段，认真观察其变化规律后再作合并分析为宜。
     本研究基于如此思路展开分析，综合各年龄层病例样分布后，分成≤35岁、36～40岁、41～45岁、46～50岁、51～55岁、56～60岁、>60岁共7个亚组后，找出了PRL-R表达阳性随年龄递增变化的35岁和55岁两个关键点，依次合并成三组后得出了PRL-R表达阳性与年龄间成负相关的阳性结果（P<005），而采取35岁和50岁作合并作类似分析却未能获得阳性结果（P>005）；另外就上述三亚组的后边两个亚组2检验结果显示，采用55岁作关键点比较的2值为8016 4，大于以50岁作关键点4008，而P值0005则远小于已50岁作关键点的0045，提示了以55岁作PRL-R下降关键点较50岁更为妥当。本研究提示了PRL-R表达阳性可能在35岁后发生稍微的增高（P>005不排除样本量不足可能），而在55岁年龄节点后却发生明显下降（P<005），进而验证了既往研究简单以35或50岁作为节点不能获得阳性结果的事实。中国女性平均绝经年龄为49～50岁，本研究发现55岁的时间节点，间接的提示了PRL-R表达状况可能不是在绝经后马上发生变化，而是延迟约5年后才发生较大幅度的下降，此结果也为后续PRL-R表达与绝经关系研究提供了有利线索。此外，本研究所选病例至今有10余年的随访数据，PRL-R与生存预后关系长期随访结果将在后续分析中报道。

参考文献
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